在分子生物學(xué)中，我們經(jīng)常要做細(xì)胞質(zhì)粒DNA的提取和檢測的試驗，以便可以獲得DNA樣本，或者用于電泳檢測分析，了解樣品中是否含有質(zhì)粒DNA，并判斷分子量的大小等等，因此，質(zhì)粒DNA的提取是基因工程實驗中zui常用的手段之一。 下面小編先為大家什么是質(zhì)粒，質(zhì)粒是一種染色體外的穩(wěn)定遺傳銀子，大小從1kb到200kb不等，大多數(shù)來自細(xì)菌的質(zhì)粒是雙鏈、共價閉合環(huán)狀的分子，并以超螺旋形式存在于宿主的細(xì)胞質(zhì)中。它是細(xì)菌內(nèi)的共生型遺傳因子，主要發(fā)現(xiàn)于細(xì)菌、放線菌和真菌細(xì)胞中，質(zhì)粒具有自主復(fù)制和轉(zhuǎn)錄能力，能在子代細(xì)胞中保持恒定的拷貝數(shù)，并表達(dá)所攜帶的遺傳信息。
質(zhì)粒的分離是利用質(zhì)粒DNA和染色體DNA在變性與復(fù)性中的差異來達(dá)到的目的。當(dāng)菌體在NaOH和SDS溶液中裂解時，蛋白質(zhì)與DNA發(fā)生變性，由于染色體DNA與質(zhì)粒DNA拓?fù)錁?gòu)型不同，染色體DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)解開，而共價閉合質(zhì)粒DNA的氫鍵雖被斷裂，但兩條互補鏈彼此相互盤繞仍會緊密地結(jié)合在儀器。當(dāng)加入中和液后，溶液pH恢復(fù)至中性，在高鹽濃度的情況下，染色體DNA之間交聯(lián)形成不溶性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)并與蛋白質(zhì)SDS復(fù)合物等形成沉淀；不同的是質(zhì)粒DNA復(fù)性迅速而準(zhǔn)確，保持可溶狀態(tài)而留在上清中。這樣，通過離心可沉淀大部分細(xì)胞碎片、染色體DNA、RNA及蛋白質(zhì)。除去沉淀后上清中的質(zhì)?？捎梅勇确鲁樘徇M(jìn)一步純化質(zhì)粒DNA。
提取質(zhì)粒DNAzui常見的方法是堿裂解法，具體步驟如下：首先講含有質(zhì)粒的細(xì)菌接種到培養(yǎng)基，經(jīng)過大約12小時的恒溫?fù)u陪后棄去上清液，加入中和液后用漩渦混勻器將溶液充分混勻，然后加入堿液進(jìn)行沉淀，這就是變性與復(fù)性，zui后的操作就是實驗室常用的沉淀的分離、純化。分離、純化DNA首先取上清液，加入分離液后采用漩渦混勻器混勻溶液，離心取上清液，加入無水乙醇后混勻，離心后棄上清液，干燥DNA即可。
在這個實驗中，我們需要用到漩渦混勻器進(jìn)行溶液混勻，本公司生產(chǎn)的漩渦混勻器可滿足每一個實驗室的需要和安全標(biāo)準(zhǔn)，該漩渦混勻器一旦檢測到試管即自動開始震動混勻，不需要施加任何外力，震動速度可調(diào)，時間可設(shè)，漩渦混勻器穩(wěn)定性高，非常適合細(xì)胞質(zhì)粒提取實驗。
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